Što je bakteriološko istraživanje? Prema kojoj shemi se provodi? Što se u ovom slučaju podrazumijeva pod sigurnošću? Koji su ciljevi i faze bakteriološkog istraživanja?
Opće informacije
Bakteriološko ispitivanje je znanstveni proces u kojem se identificiraju bakterije i proučavaju njihova svojstva kako bi se postavila mikrobiološka dijagnoza. Ovdje je od velike važnosti određivanje vrste ili vrste nastalog mikroorganizma (podrazumijeva se čista kultura). To je popraćeno proučavanjem biokemijskih i fizioloških svojstava organizama, kao i sklonosti stvaranju toksina. U te se svrhe koriste reakcije precipitacije i aglutinacije. Također se prakticira zaraziti laboratorijske životinje uz naknadno otkrivanje patoloških promjena.
Rad s ispitnim materijalom
Algoritam bakteriološke studije osigurava strogo poštivanje posebnih uputa. Stoga se ispitni materijal mora skupljati u sterilne posude u aseptičnim uvjetima. Također je potrebno voditi brigukako bi se osigurala dostava u laboratorij što je prije moguće. Poželjno je skladištenje uzoraka na hladno. Tehnika bakteriološkog istraživanja predviđa mnoge moguće situacije. Dakle, vrsta objekta, svojstva mikroorganizma i priroda bolesti često zahtijevaju izradu individualnih uputa za rad. U radu se koristi veliki broj različitih metoda. Jedna od najčešćih je bakterioskopija. Ali ako bakterije nisu fiksirane, tada se koristi zgnječena ili viseća kap. Treba napomenuti da posljednje dvije opcije karakterizira povećana razina zaraznosti.
Bakterioskopija
U ovom slučaju se koriste potezi. Da biste ih stvorili, trebate rasporediti kap tekućine koja se proučava po površini staklenog stakla. Zates bi ga trebao osušiti. To se često radi pomicanjem lijeka kroz plamen dobiven iz plinskog plamenika. Iako se spojevi za pričvršćivanje mogu koristiti kao alternativa. Kako bi se označilo da su s ovim pripravkom provedene pripremne radnje, on je obojen. Svrha takve manipulacije je točnost, što je vrlo važno kada se provodi mikroskopski i bakteriološki pregled. Uostalom, ako ponovno upotrijebite lijek za drugu svrhu, dobit ćete kašu, s kojom će biti vrlo teško učinkovito raditi.
Zašto je bakterioskopija tako popularna
Ne samo zbog dostupnosti ove metode. Ako se provodi bakteriološka studija svježeg pripravka, tada se utvrđuje patogenmogu se koristiti mikrokemijske reakcije ili selektivno bojenje različitih strukturnih dijelova mikroorganizma. Koji je bolji? Točniji rezultat može se dobiti pri radu s obojenim pripravkom. U tom se slučaju ispitni materijal nanosi na prethodno pripremljeno staklo. I svakako tanak (i ako je moguće ravnomjeran) sloj. Nakon toga morate pričekati da se lijek osuši na zraku. Mikroorganizmi se zatim fiksiraju pomoću jedne od konvencionalnih metoda. Nakon toga, ohlađeni pripravak se podvrgava bojanju diferencijalnom ili jednostavnom bojom. Za to se mogu koristiti suhi i nativni pripravci. Nakon toga ostaje usmjeriti ultraljubičaste ili kratke plave zrake na mjesto nakupljanja organizama, što uzrokuje da cijeli mikrob ili pojedini dijelovi njegovog tijela svijetle.
Praktična primjena bakterioskopije
Upotrebljava se za dijagnosticiranje brojnih zaraznih bolesti. Najpoznatije od njih su tuberkuloza, gonoreja i povratna groznica. Osim toga, pribjegavaju istraživanju kako bi proučili cijeli kompleks mikroflore organa ili proizvoda. Ali kritičari često ukazuju na relativnu nepouzdanost i netočnost ove metode.
Usjevi i subkulture bakterijskih kultura
Izvedite ih pomoću Pasteurove pipete. Provođenje bakteriološkog i citološkog pregleda često je teško izvesti bez inokulacije i subkulture tijekom rada. Kada radite s Pasteurovom pipetom, njezin vrhodlomiti pincetom. Sam alat se zatim nosi kroz plamen plamenika i zatim se ostavi da se ohladi. Usput, za sjetvu se mogu koristiti i tekući i čvrsti hranjivi mediji. Na izbor utječe koji se ciljevi bakteriološkog istraživanja žele. Istodobno, potrebno je pridržavati se algoritma rada i sigurnosnih mjera. Dakle, kada radite s tekućim hranjivim medijem, potrebno je osigurati da se ne izlije i ne navlaži rubove pluta i epruveta. Kada se studija provodi s čvrstim materijalom, često se koristi posebna igla za ulazak u kulturu. Kada se sjetva i presijavanje provode, treba ih provesti u blizini plamena plinskog plamenika. Zbog čistoće pokusa, epruveta ne smije dugo ostati otvorena. Što se tiče alata s kulturom: pazite da ništa ne dodiruje. Također, tehnika bakteriološkog istraživanja predviđa spaljivanje rubova epruvete prije zatvaranja. Gotov proizvod treba potpisati odmah nakon proizvodnje kako bi se izbjegla zabuna u budućnosti.
Učinkovitost sjetve
Vjeruje se da ova metoda omogućuje dobivanje točnijih i pouzdanijih podataka tijekom bakteriološke dijagnoze od prethodno razmatrane bakterioskopije. U ovom slučaju, algoritam radnji je sljedeći:
- U početku se čista kultura razmaže po površini hranjivog medija, koji se izlije u Petrijevu zdjelicu.
- Početnu sjetvu treba obaviti u uvjetima koji su povoljni za vrstumikroorganizmi.
- Nakon dan ili dva, u prisutnosti optimalnog okruženja, sve prikladne kolonije sele se tamo gdje se mogu maksimalno razviti. Time se oslobađaju od strane mikroflore.
Krajnji rezultat je kultura homogenih bakterija koja se može identificirati.
Čiste kulture
Ali kako se prave? Za to se koriste biološke i mehaničke metode. U prvom slučaju veliku ulogu igraju hranjivi mediji, gdje postoje potrebni uvjeti pogodni za razvoj određene kulture. Pristup se također može koristiti kada se zaraze laboratorijske životinje osjetljive na određenu vrstu bakterija. Mehaničke metode temelje se na korištenju sterilnog instrumenta, kojim se kultura stavlja u hranjivi medij koji se nalazi u prvoj, drugoj i trećoj Petrijevoj zdjelici. Tada je potrebno pričekati da pojedine kolonije narastu, a čista kultura će se već izdvojiti iz njih. Bakterije se također mogu uzgajati u posebnim termostatima, gdje se temperatura održava na određenoj razini (obično oko 37 stupnjeva). U ovom slučaju, proces se nastavlja oko jedan dan. No, ovisno o vrsti mikroorganizama, mogu se ustanoviti i drugi pojmovi. Također je važna prisutnost potrebne koncentracije kisika. Da biste to učinili, koristite različite metode prozračivanja. Do sada smo govorili o situaciji u cjelini i općenito, ali sada usmjerimo pažnju na to što je shema bakteriološkog istraživanja.
Vježba
Skup metoda se često koristi za otkrivanje patogenih mikroorganizama u tijelu pacijenta ili potencijalnog nositelja. Korišteni materijali i metode ovise o ciljevima analize, kao i o uvjetima okoline u kojoj se rad izvodi. U praksi se najčešće bakterije otkrivaju putem hemokultura uzetih od osobe ili životinje. Ako su lokalne lezije dobro definirane, patogeni se mogu tražiti u problematičnim područjima. To je tipično za takve bolesti kao što su dizenterija, gonoreja, difterija i niz sličnih. U posebno teškim slučajevima ovaj se proces dijeli na odvojene faze bakteriološkog pregleda (što je tipično za trbušni tifus). Svaki od njih koristi svoje metode, koje su usmjerene na pronalaženje uzroka infekcije. Pogledajmo pobliže situaciju s trbušnim tifusom. U prvom tjednu bolesti najpouzdaniji način dijagnosticiranja bolesti su hemokulture. Na drugom se takvom smatra serološka studija. U trećem tjednu se pregledava stolica. Posljednja metoda se smatra provjerom rekonvalescenta.
Identifikacija mikroorganizama
Počinje procesom bojenja. Zatim gledaju kako bakterija može razgraditi ugljikohidrate, aminokiseline i tako dalje. Dodatno, ovaj se proces može nadopuniti proučavanjem drugih svojstava koja svaki pojedini rod ili vrsta mikroorganizama posjeduje. Kao primjer treba navesti mogućnosti otapanja eritrocita raznih životinja, učinak na koagulaciju krvne plazme i otapanje ugruška.fibrin i tako dalje. Sve su to različita obilježja pojedinih predstavnika mikrosvijeta. Također, serološka identifikacija može se koristiti za konačno prepoznavanje (ali to se obično odnosi na patogene bakterije koje pripadaju crijevnoj obitelji).
Zaključak
Treba napomenuti da se brojni mikroorganizmi ne mogu identificirati metodama opisanim u članku. U ovom slučaju naširoko se koristi praksa zaraze laboratorijskih životinja. Izračun se vrši na temelju činjenice da će se pojaviti karakteristična toksigenost ili patogenost, koja se ne opaža u umjetnim uvjetima. Infekcija se također može koristiti kao metoda za nakupljanje patogenih mikroba. A već kada se uspoređuju karakteristike proučavane kulture, pronađene u procesu proučavanja bioloških, morfoloških, seroloških i biokemijskih svojstava, možemo reći da se zna o kakvim mikrobima imamo posla. Identifikacija znači naznaku roda, vrste i vrste bakterije. Ako ispitivani mikroorganizam u određenim svojstvima odstupa od svoje tipične karakteristike, to se mora naznačiti. Brojni stručnjaci smatraju da će u takvim slučajevima biti korisno ponovno se identificirati uz dupliciranje svih korištenih metoda i tehnika. Ponekad se istraživanje može podići na sljedeću razinu, što zahtijeva ozbiljniji (i skuplji) pristup. Ako su dobiveni negativni rezultati, to znači da je pripremamikroorganizmi su bili odsutni ili nisu bili održivi. No, radi točnosti istraživanja, ako se sumnja na veći broj nositelja bacila (dizenterija, difterija, trbušni tifus), u takvim slučajevima se prikazuju ponovne provjere. To je potrebno kako bi stručnjaci imali točnu predodžbu o tome s čime se moraju nositi.
