Nedavno je razvijena pouzdana, vrlo osjetljiva i brza metoda za dijagnosticiranje raznih ljudskih zaraznih bolesti. Ova metoda se zove "PCR analiza". Što je to, koja je njegova bit, koje mikroorganizme može otkriti i kako ga pravilno uzimati, reći ćemo u našem članku.
Povijest otkrića
Izumio je metodu lančane reakcije polimeraze (PCR) od strane američkog znanstvenika Karyja Mullisa 1983. U početku je dijagnostičku metodu patentirala Cetus Corporation, u kojoj je radio njezin tvorac. No 1992. sva prava i patenti prodani su tvrtki Hoffman-La Roche. Nakon toga se pokazalo da su se slične studije provodile paralelno, a zabilježili su ih i drugi američki biolozi, poput Alice Chen, Davida Edgara, Johna Trella. 1980. sovjetski znanstvenici A. Slyusarenko, A. Kaledin i S. Gorodetsky također su se bavili ovim problemom. Stoga je bilo nemoguće odrediti jedinog nositelja autorskog prava. Mnogi istaknuti biokemičari dali su određeni doprinos razvoju tehnike polimerazne lančane reakcije i patentirali svoje inovacije. Trenutno, analizaPCR se provodi posvuda u posebno opremljenim laboratorijima.
Suština PCR dijagnostičke metode
PCR analiza: što je to i kako funkcionira? Bit metode je povećati volumen određene mikrobne okoline u umjetnim uvjetima pomoću posebnog enzima DNA polimeraze. Za to se postojeći DNK materijal višestruko umnožava. Dakle, u prisutnosti patogenog mikroorganizma u uzorku, njegova količina će biti povećana zbog biokemijskih laboratorijskih manipulacija, te neće biti teško otkriti bakteriju pod mikroskopom.
Kako se vrši istraživanje materijala?
Potrebno za analizu:
- DNA matrica;
- primeri koji povezuju krajeve komada materijala;
- enzim DNA polimeraze otporan na toplinu;
- kemikalije zbog kojih enzimi rade ispravno;
- puferska otopina neophodna za stvaranje odgovarajućih uvjeta za rast i razvoj DNK materijala.
Za izvođenje PCR-a izvodi se 25-30 ponavljanja, koja se sastoje od tri faze: denaturacija, žarenje i elongacija.
Za analizu polimerne lančane reakcije koristi se poseban uređaj - pojačalo. Moderna oprema omogućuje postavljanje potrebnog programa za cijevi za grijanje i hlađenje kako bi se uklonile greške tijekom dijagnostike.
Gdje se koristi dijagnostika?
Metoda polimerne lančane reakcije koristi se u raznim područjima medicine:
- kriminalisti saidentificira genetski materijal kao što je kosa, slina ili krv;
- PCR krvni test pomaže kod genotipizacije, na primjer, za otkrivanje individualne genetski inherentne reakcije na određeni lijek;
- koristeći ovu metodu za utvrđivanje prisutnosti obiteljskih veza među ljudima;
- Najpopularnija PCR metoda postala je u medicinskoj dijagnostici za određivanje različitih zaraznih bolesti.
Koje infekcije otkriva PCR?
Dakle, medicina dugo i uspješno koristi PCR analizu. Što je to, već znamo. I koji se uzročnici bolesti mogu otkriti s njim? PCR metodom dijagnosticiraju se sljedeće zarazne bolesti:
- hepatitis A, B, C;
- ureaplazmoza;
- kandidijaza;
- klamidija;
- mikoplazmoza;
- gardnereloza;
- infektivna mononukleoza;
- trihomonijaza;
- infekcija papiloma virusom;
- tuberkuloza;
- herpes tipovi 1 i 2;
- helikobakterioza;
- citomegalovirus;
- difterija;
- salmoneloza;
- HIV infekcija.
Također, PCR metode se koriste u dijagnozi raka.
Prednosti metode
PCR dijagnostika ima nekoliko prednosti:
- Visoka osjetljivost. Čak i u prisutnosti samo nekoliko molekula DNK mikroorganizma, PCR analiza utvrđuje prisutnost infekcije. Metoda će pomoći kod kroničnih i latentnih bolesti. Često u takvim slučajevima, mikroorganizaminače se ne može kultivirati.
- Svaki materijal je prikladan za istraživanje, kao što su slina, krv, genitalni sekret, kosa, epitelne stanice. Najčešća je analiza krvi i urogenitalnog razmaza za PCR.
- Nije potreban dugoročni usjev. Automatizirani dijagnostički proces omogućuje vam da dobijete rezultate studije nakon 4-5 sati.
- Metoda je gotovo 100% pouzdana. Zabilježeni su samo izolirani slučajevi lažno negativnih rezultata.
- Mogućnost identificiranja nekoliko vrsta patogena iz jednog uzorka materijala. To ne samo da ubrzava proces dijagnosticiranja bolesti, već i značajno smanjuje materijalne troškove. Često liječnik propisuje sveobuhvatnu PCR analizu. Cijena pregleda, koji se sastoji od određivanja šest uzročnika, je oko 1500 rubalja.
Preporuke za pripremu za analizu
Kako bi rezultati bili pouzdani tijekom PCR studije, potrebno je napraviti test, slijedeći preporuke za preliminarnu pripremu za dijagnozu:
- Prije doniranja sline, trebali biste se suzdržati od jela i uzimanja lijekova 4 sata prije uzorkovanja. Neposredno prije zahvata isperite usta prokuhanom vodom.
- Navedena pravila također se trebaju pridržavati prilikom uzimanja uzorka s unutarnje površine obraza. Nakon ispiranja preporuča se lagana masaža kože kako bi se istaknuo sekret žlijezde.
- Urin se obično skuplja kod kuće. Da biste to učinili, morate provesti temeljit WCgenitalije. Sakupite 50-60 ml urina u sterilnu plastičnu posudu. Kako bi se osigurala čistoća materijala, ženama se preporuča umetanje tampona u rodnicu, a muškarcima što više povući kožni nabor. Nemojte donirati tijekom menstruacije.
- Da biste donirali spermu, morate se suzdržati od spolnih odnosa 3 dana prije uzorkovanja. Liječnici također savjetuju odlazak u saunu i toplu kupku, pijenje alkohola i začinjenu hranu. Morate se suzdržati od mokrenja 3 sata prije testa.
- Za uzimanje urogenitalnog brisa, na primjer, ako se radi PCR test na klamidiju, ženama i muškarcima se savjetuje seksualni odmor 3 dana. Antibakterijske lijekove ne treba uzimati 2 tjedna prije analize. Tjedan dana morate prestati koristiti intimne gelove, masti, vaginalne čepiće, ispiranje. 3 sata prije pregleda morate se suzdržati od mokrenja. Za vrijeme menstruacije, uzorkovanje se ne provodi, samo 3 dana nakon prestanka iscjedka krvi možete uzeti urogenitalni bris.
PCR tijekom trudnoće
Tijekom razdoblja iščekivanja bebe mnoge su spolno prenosive infekcije iznimno opasne za normalan razvoj fetusa. Polno prenosive bolesti mogu izazvati intrauterino usporavanje rasta, pobačaj ili prijevremeni porod, kongenitalne malformacije djeteta. Stoga je iznimno važno podvrgnuti se PCR pregledu u ranoj trudnoći. Potrebno je proći analizu prilikom registracije - do 12 tjedana.
Materijal se posebnom četkom uzima iz cervikalnog kanala. Postupak je bezbolan i ne predstavlja opasnost za bebu. Obično se tijekom trudnoće provodi analiza na klamidiju PCR metodom, kao i na ureaplazmozu, mikoplazmozu, citomegalovirus, herpes, papilomavirus. Takav kompleks ispitivanja naziva se PCR-6.
PCR za dijagnozu HIV-a
Zbog činjenice da je metoda lančane reakcije polimerazom vrlo osjetljiva na promjene u tijelu i uvjete dijagnoze, mnogi čimbenici mogu utjecati na rezultat. Stoga PCR analiza za HIV infekciju nije pouzdana metoda, njezina je učinkovitost 96–98%. U preostalih 2-4% slučajeva test daje lažno pozitivne rezultate.
Ali u nekim situacijama, HIV PCR dijagnostika je nezamjenjiva. Obično se daje osobama s lažno negativnim ELISA rezultatom. Takvi pokazatelji ukazuju da osoba još nije razvila antitijela na virus i da se ne mogu otkriti bez višestrukog povećanja broja. Upravo to se može postići provođenjem PCR testa krvi.
Ova dijagnostika je također neophodna za djecu prve godine života rođenu od HIV-pozitivne majke. Metoda je jedini način da se pouzdano utvrdi status djeteta.
PCR za dijagnosticiranje hepatitisa
Metoda lančane reakcije polimerazom omogućuje otkrivanje DNK virusa hepatitisa A, B, C mnogo prije stvaranja protutijela na infekciju ili pojave simptoma bolesti. Posebno je učinkovita PCR analiza na hepatitis C, jer je u 85% slučajeva ova bolest asimptomatska i bezpravodobno liječenje prelazi u kronični stadij.
Pravovremeno otkrivanje patogena pomoći će izbjeći komplikacije i dugotrajno liječenje.
Sveobuhvatni PCR pregled
Složena PCR analiza: što je to? Riječ je o pregledu metodom polimerne lančane reakcije koja uključuje istovremeno određivanje više vrsta infekcija: mycoplasma genitalium, mycoplasma hominis, gardnerella vaginalis, candida, trichomonas, cytomegalovirus, ureaplasma urealiticum, herpes gonorrhea 2, tipovi herpes gonorrhee 2, herpes gonorrhea 2. Cijena takve dijagnostike kreće se od 2000 do 3500 rubalja. ovisno o klinici, korištenim materijalima i opremi, kao i o vrsti analize: kvalitativna ili kvantitativna. Što je potrebno u vašem slučaju - odlučit će liječnik. U nekim slučajevima dovoljno je samo utvrditi prisutnost patogena, u drugima, na primjer, s HIV infekcijom, kvantitativni titar igra važnu ulogu. Kada se dijagnosticiraju svi gore navedeni patogeni, pregled se naziva "PCR-12 analiza".
Transkript rezultata analize
Dešifriranje PCR analize nije teško. Postoje samo 2 skale pokazatelja - "pozitivan rezultat" i "negativan rezultat". Kada se otkrije patogen, liječnici mogu potvrditi prisutnost bolesti sa 99% sigurnosti i započeti liječenje pacijenta. Kod kvantitativne metode za određivanje infekcije, odgovarajući stupac će označavati brojčani pokazatelj otkrivenih bakterija. Samo liječnik može utvrditi opseg bolesti i propisati potrebno liječenje.
U nekim slučajevima, na primjer, kod utvrđivanja HIV infekcije PCR-om, s negativnim rezultatom, postaje potrebno provesti dodatne pretrage kako bi se potvrdili dobiveni pokazatelji.
Gdje se testirati?
Gdje napraviti PCR test: u javnoj klinici ili u privatnom laboratoriju? Nažalost, u općinskim zdravstvenim ustanovama oprema i metode su često zastarjele. Stoga je bolje dati prednost privatnim laboratorijima s modernom opremom i visokokvalificiranim osobljem. Osim toga, u privatnoj klinici rezultate ćete dobiti mnogo brže.
U Moskvi mnogi privatni laboratoriji nude PCR analizu za razne infekcije. Na primjer, u takvim klinikama kao što su Vita, Complex Clinic, Happy Family, Uro-Pro, provodi se PCR analiza. Cijena pregleda je od 200 rubalja. za identifikaciju jednog patogena.
Može se zaključiti da je dijagnoza zaraznih bolesti PCR-om u većini slučajeva brz i pouzdan način otkrivanja patogena u tijelu u ranim fazama infekcije. Ali ipak, u određenim slučajevima vrijedi odabrati druge dijagnostičke metode. Samo stručnjak može odrediti potrebu za takvom studijom. Dešifriranje PCR analize također zahtijeva profesionalni pristup. Slijedite savjet liječnika i nemojte raditi pretrage koje vam nisu potrebne.
