Laboratorijska dijagnoza gotovo svih zaraznih bolesti temelji se na otkrivanju antitijela u krvi bolesnika, koja se stvaraju protiv antigena patogena, metodama seroloških reakcija. Ušli su u medicinsku praksu od kasnog devetnaestog do početka dvadesetog stoljeća.
Razvoj znanosti pomogao je u određivanju antigenske strukture mikroba i kemijskih formula njihovih toksina. To je omogućilo stvaranje ne samo terapijskih, već i dijagnostičkih seruma. Dobivaju se davanjem atenuiranih patogena laboratorijskim životinjama. Nakon nekoliko dana izlaganja, krv zečeva ili miševa se koristi za pripremu pripravaka koji se koriste za identifikaciju mikroba ili njihovih toksina serološkim testovima.
Vanjska manifestacija takve reakcije ovisi o uvjetima njenog nastanka i o stanju antigena u krvi bolesnika. Ako su mikrobne čestice netopive, one se precipitiraju, liziraju, vežu ili imobiliziraju u serumu. Ako su antigeni topljivi, pojavljuje se fenomen neutralizacije ili precipitacije.
Reakcija aglutinacije (RA)
Test serološke aglutinacije je vrlo specifičan. Lako se izvodi i priličnovizualno, za brzo određivanje prisutnosti antigena u krvnom serumu pacijenta. Koristi se za ispitivanje Vidalove reakcije (dijagnoza trbušnog tifusa i paratifusa) i Weiglove (tifusne groznice).
Bazi se na specifičnoj interakciji između ljudskih antitijela (ili aglutinina) i mikrobnih stanica (aglutenogena). Nakon njihove interakcije nastaju čestice koje se talože. Ovo je pozitivan znak. Živi ili ubijeni mikrobiološki agensi, gljive, protozoe, krvne stanice i somatske stanice mogu se koristiti za postavljanje reakcije.
Kemijski, reakcija je podijeljena u dva koraka:
- Specifična veza antitijela (AT) s antigenima (AG).
- Nespecifično - taloženje AG-AT konglomerata, odnosno stvaranje aglutinata.
Indirektna reakcija aglutinacije (IPHA)
Ova reakcija je osjetljivija od prethodne. Koristi se za dijagnosticiranje bolesti uzrokovanih bakterijama, intracelularnim parazitima i protozoama. Toliko je specifičan da se mogu otkriti čak i vrlo niske koncentracije antitijela.
Za njegovu proizvodnju koriste se pročišćeni ovčji eritrociti i ljudska crvena krvna zrnca prethodno tretirana antitijelima ili antigenima (ovisno o tome što laboratorijski tehničar želi pronaći). U nekim slučajevima, ljudske crvene krvne stanice liječe se imunoglobulinima. Smatra se da je došlo do seroloških reakcija eritrocita ako su se smjestili na dno epruvete. O pozitivnoj reakcijirecimo kada su stanice raspoređene u obliku obrnutog kišobrana, koji zauzima cijelo dno. Negativna reakcija se računa ako su se eritrociti smjestili u stupac ili u obliku gumba u sredini dna.
Reakcija oborine (RP)
Serološke reakcije ovog tipa koriste se za otkrivanje iznimno malih čestica antigena. To mogu biti, na primjer, proteini (ili njihovi dijelovi), spojevi proteina s lipidima ili ugljikohidratima, dijelovi bakterija, njihovi otrovi.
Serume za reakciju dobivaju se umjetnom zarazom životinja, obično zečeva. Ovom metodom možete dobiti apsolutno bilo koji precipitirajući serum. Postavka seroloških reakcija precipitacije je po mehanizmu djelovanja slična reakcijama aglutinacije. Protutijela sadržana u serumu spajaju se s antigenima u koloidnoj otopini, tvoreći velike proteinske molekule koje se talože na dnu epruvete ili na supstratu (gelu). Ova se metoda smatra vrlo specifičnom i može otkriti čak i zanemarive količine tvari.
Koristi se za dijagnosticiranje kuge, tularemije, antraksa, meningitisa i drugih bolesti. Osim toga, on je uključen u sudsko-medicinski pregled.
reakcija precipitacije gela
Serološke reakcije mogu se provesti ne samo u tekućem mediju, već iu agar gelu. To se naziva metoda difuzne precipitacije. Uz njegovu pomoć proučava se sastav složenih antigenskih smjesa. Ova metoda temelji se na kemotaksiji antigena na antitijela i obrnuto. U gelu se krećujedni prema drugima različitim brzinama i, susrećući se, tvore oborinske linije. Svaki red je jedan set AG-AT.
Reakcija neutralizacije egzotoksina s antitoksinom (PH)
Antitoksični serumi su u stanju neutralizirati djelovanje egzotoksina koji proizvode mikroorganizmi. Ove serološke reakcije temelje se na tome. Mikrobiologija koristi ovu metodu za titriranje seruma, toksina i toksoida i određivanje njihove terapijske aktivnosti. Snaga neutralizacije toksina određena je konvencionalnim jedinicama - AE.
Osim toga, zahvaljujući ovoj reakciji, moguće je odrediti vrstu ili vrstu egzotoksina. Ovo se koristi u dijagnozi tetanusa, difterije, botulizma. Studija se može izvesti i "na staklu" i u gelu.
Reakcija lize (RL)
Imunološki serum, koji ulazi u tijelo pacijenta, osim svoje glavne funkcije pasivnog imuniteta, ima i svojstva lize. U stanju je otopiti mikrobne agense, stanične strane elemente i viruse koji ulaze u tijelo pacijenta. Ovisno o specifičnosti antitijela uključenih u serum, izdvajaju se bakteriolizini, citolizini, spirohetolizini, hemolizini i drugi.
Ova specifična antitijela se nazivaju "komplement". Nalazi se u gotovo svim ljudskim tjelesnim tekućinama, ima složenu strukturu proteina i iznimno je osjetljiv na porast temperature, tresenje, kiseline i izravnu sunčevu svjetlost. Ali u osušenom stanju može se zadržatinjegova svojstva lizanja do šest mjeseci.
Postoje ove vrste seroloških reakcija ove vrste:
- bakterioliza;
- hemoliza.
Bakterioliza se provodi korištenjem krvnog seruma pacijenta i specifičnog imunološkog seruma sa živim mikrobima. Ako je u krvi prisutno dovoljno komplementa, tada će istraživač vidjeti kako se bakterija lizira, a reakcija će se smatrati pozitivnom.
Druga serološka reakcija krvi je da se suspenzija crvenih krvnih stanica pacijenta tretira serumom koji sadrži hemolizine, koji se aktiviraju samo u prisutnosti određenog komplimenta. Ako postoji, tada laboratorijski asistent promatra otapanje crvenih krvnih stanica. Ova reakcija se široko koristi u suvremenoj medicini za određivanje titra komplementa (odnosno njegove najmanje količine koja izaziva lizu eritrocita) u krvnom serumu i za provođenje analize za fiksaciju komplementa. Na taj se način provodi serološki test na sifilis - Wassermanova reakcija.
Reakcija fiksacije komplementa (CFR)
Ova reakcija se koristi za otkrivanje antitijela na infektivni agens u pacijentovom krvnom serumu, kao i za identifikaciju patogena po njegovoj antigenskoj strukturi.
Do sada smo opisali jednostavne serološke reakcije. RSK se smatra složenom reakcijom, budući da u njoj ne djeluju dva, već tri elementa: antitijelo, antigen i komplement. Njegova bit leži u činjenici da je interakcija između antitijela i antigenajavlja se samo u prisutnosti proteina komplementa, koji se adsorbiraju na površini formiranog AG-AT kompleksa.
Sami antigeni, nakon dodavanja komplementa, prolaze kroz značajne promjene, što pokazuje kvalitetu reakcije. To može biti liza, hemoliza, imobilizacija, baktericidno ili bakteriostatsko djelovanje.
Sama reakcija se odvija u dvije faze:
- Formiranje kompleksa antigen-antitijelo koje nije vizualno vidljivo ispitivaču.
- Promjena antigena pod djelovanjem komplementa. Ova se faza najčešće može pratiti golim okom. Ako reakcija nije vizualno vidljiva, tada se koristi dodatni sustav indikatora za prepoznavanje promjena.
Sustav indikatora
Ova reakcija temelji se na fiksaciji komplementa. Pročišćeni ovnuški eritrociti i hemolitički serum bez komplementa dodaju se u epruvetu sat vremena nakon postavljanja RSC. Ako nevezani komplement ostane u epruveti, tada će se spojiti s AG-AT kompleksom koji nastaje između ovčjih krvnih stanica i hemolizina i uzrokovati njihovo otapanje. To će značiti da je RSK negativan. Ako su eritrociti ostali netaknuti, tada je reakcija pozitivna.
Test hemaglutinacije (RGA)
Postoje dvije fundamentalno različite reakcije hemaglutinacije. Jedan od njih je serološki, koristi se za određivanje krvnih grupa. U ovom slučaju crvene krvne stanice stupaju u interakciju s antitijelima.
I drugireakcija se ne odnosi na serološke, budući da crvene krvne stanice reagiraju s hemaglutininima koje proizvode virusi. Budući da svaki patogen djeluje samo na specifične eritrocite (piletina, janjetina, majmun), ova se reakcija može smatrati vrlo specifičnom.
Možete odrediti je li reakcija pozitivna ili negativna prema položaju krvnih stanica na dnu epruvete. Ako njihov uzorak podsjeća na obrnuti kišobran, tada je željeni virus prisutan u krvi pacijenta. A ako su se svi eritrociti formirali poput stupca novčića, onda nema željenih patogena.
Test inhibicije hemaglutinacije (HITA)
Ovo je vrlo specifična reakcija koja vam omogućuje da odredite vrstu, vrstu virusa ili prisutnost specifičnih antitijela u krvnom serumu pacijenta.
Njegova bit leži u činjenici da antitijela dodana u epruvetu s ispitnim materijalom sprječavaju taloženje antigena na eritrocitima, čime se zaustavlja hemaglutinacija. Ovo je kvalitativni znak prisutnosti u krvi specifičnih antigena za specifični virus koji se traži.
Imunofluorescentna reakcija (RIF)
Reakcija se temelji na sposobnosti detekcije AG-AT kompleksa fluorescentnom mikroskopijom nakon njihovog tretmana fluorokromnim bojama. Ova metoda je jednostavna za rukovanje, ne zahtijeva izolaciju čiste kulture i oduzima malo vremena. Neophodan je za brzu dijagnostiku zaraznih bolesti.
U praksi se ove serološke reakcije dijele u dvije vrste: izravne i neizravne.
Izravni RIF se proizvodi odantigen, koji je prethodno tretiran fluorescentnim serumom. A neizravni je taj da se prvo lijek tretira konvencionalnim dijagnostikumom koji sadrži antigene za protutijela od interesa, a zatim se ponovno aplicira luminiscentni serum koji je specifičan za proteine AG-AT kompleksa i mikrobne stanice postati vidljiv pod mikroskopom.
