Hepatitis C je infekcija jetre uzrokovana virusom Flaviviridae HCV, koji se sastoji od jedne ili više RNA molekula. U pravilu se poduzima niz dijagnostičkih mjera kako bi se kod bolesnika ustanovio hepatitis C. PCR je analiza koja točno potvrđuje dijagnozu. Često zaključak daju liječnici kada pacijent već ima prve znakove bolesti.
Što je hepatitis C
Oštećenje jetre virusnom infekcijom koja se prenosi krvlju ili spolnim kontaktom u medicini se naziva hepatitis C. Uzročnik je virus nestaničnih infektivnih uzročnika iz obitelji Flaviviridae koji sadrži RNA. Infekcija može dugo ostati u tijelu, a da se ne pokaže. Stoga, samo kada se mikroorganizam otkrije testom krvi pomoću PCR RNA RNA, hepatitis C (kao dijagnoza) smatra se opravdanim.
Flavivirus se ne proizvodi u umjetno uzgojenim izoliranim stanicama. U procesu razmnožavanja, infektivni agens stvara imunološki različite modifikacije. Ovi čimbenici sprječavaju tijelo da dajeodgovarajući zaštitni odgovor, a stručnjaci imaju poteškoća u razvoju učinkovitog cjepiva.
Virus se prenosi parenteralno. Za infekciju mora ući u dovoljnim količinama izravno u krvotok.
Koje se pretrage rade na hepatitis C
Virusne patologije jetre dijagnosticiraju se laboratorijskim pretragama. Kliničke studije hepatitisa C provode se proučavanjem stranih i opasnih antigena ili proteinskih spojeva (antitijela) u biomaterijalu pacijenta, uglavnom u krvi.
- Enzimatski imunotest (ELISA). Metoda se temelji na otkrivanju lgM antitijela u krvi. Imunoglobulin se smatra najvećim i pentamer je. Očituje se primarnom zaštitnom reakcijom limfocita na nepoznatu stranu tvar.
- Radioimunotest (RIA) - kvantitativno određivanje lgM imunoglobulina korištenjem označenog radioaktivnog izotopa joda.
- PCR hepatitisa C - određivanje virusne RNA u biomaterijalu (krvi). Ova analiza pouzdano potvrđuje dijagnozu.
IgG testiranje nije pouzdano. Njegova prisutnost u krvnom serumu može ukazivati ne samo na prisutnost flavivirusa, već i na drugu prošlu infekciju koja ima isti patogen.
Što određuje PCR analizu
Lančana reakcija polimeraze (PCR) temelji se na identifikaciji DNA regija specifičnih za određene patogene u uzorcima materijala za istraživanje (epitel, krv). Analiza omogućuje identificiranje najmanjih patogenih organizama (virusa) otkrivanjem njihove RNA ili DNK u biološkom materijalu.
Laboratorijski postupak za detekciju antitijela Hepatitis C PCR se provodi u 3 faze:
- Odaberi. Proučeni biomaterijal se pročišćava od nečistoća i DNK se dobiva u mobilnoj fazi kromatografske kolone.
- Pojačanje. Analiza se provodi u ciklusu uređaj-termostat. Grije i hladi epruvete s određenom cikličnošću. Za jednu studiju izvodi se do 35 ciklusa. Rezultat je dovoljan broj fragmenata DNK za otkrivanje, identifikaciju i procjenu patogena.
- Elektroforeza. Dobiveni fragmenti se stavljaju u gel s različitom zasićenošću agaroze i provodi se elektroforeza. Rezultirajući elektroferogram se analizira na računalu.
Ne koristi se samo standardna PCR studija, već i PCR analiza u stvarnom vremenu. Ovo je dijagnostika u stvarnom vremenu. Metoda omogućuje kvalitativnu i kvantitativnu analizu, što omogućuje prepoznavanje nastanka i dinamike bolesti, kao i propisivanje terapije usmjerene na uklanjanje uzroka nastanka patologije. PCR u stvarnom vremenu također se koristi za određivanje čiste kulture infektivnih agenasa (genotipizacija).
Kako se radi test lančane reakcije polimerazom
Za dijagnozu može se koristiti bilo koja ljudska biološka tekućina. Biomaterijal za testiranje na hepatitis C obično je krv.
Uzorkovanje za dijagnostiku provodi se u proceduriured. Za vađenje krvi koristite jednokratne epruvete s tvari koja inhibira zgrušavanje krvi. Aktivnosti usmjerene na sprječavanje širenja infektivnih agenasa pomažu u izbjegavanju ulaska drugog soja mikroorganizama izvana.
Krv za PCR hepatitisa C uzima se ujutro na prazan želudac. Uzorak se odmah šalje u laboratorij. Dopušteno je skladištenje biomaterijala na temperaturi od +4 do +8 stupnjeva Celzija. Spremnici su označeni i opremljeni uputama. Rezultati testa dostupni su u roku od 48 sati, ponekad i prije.
Vrste PCR-a
Raspon primjene lančane reakcije polimeraze je prilično širok. Infekcionisti pomoću PCR-a određuju hepatitis B, bolesti koje prenose insekti koji sišu krv, AIDS, tuberkuloza. U onkologiji se ovom metodom tumorske stanice otkrivaju u ranoj fazi.
Postoji oko četrnaest vrsta analiza. Korištenje jedne ili druge vrste ovisi o opsegu i konačnim rezultatima analiza. Neke vrste PCR-a su nezamjenjive tamo gdje je rezultat potreban unutar 20 minuta.
Za dijagnosticiranje hepatitisa C koriste se 3 vrste polimerazne lančane reakcije:
- Kvalitativna procjena može biti pozitivna, što ukazuje na prisutnost infekcije u tijelu, ili negativna, što ukazuje na odsutnost flavivirusa.
- PCR u stvarnom vremenu (kvantitativna analiza) - određuje kvantitativnu RNA patogena u IU/ml.
- Genotipizacija je analiza koja otkriva tip (genotip) virusa.
Za točnu identifikaciju i određivanje bolesti, a zatimsve tri vrste studija koriste se za propisivanje optimalne terapije.
Kvalitativna analiza lančane reakcije polimerazom
Analiza je obavezna za sve koji imaju ELISA test koji je otkrio antitijela na HCV. Kvalitativni PCR za hepatitis C je standardni test osjetljivosti. Metoda je usmjerena samo na otkrivanje, ne vrši se brojanje ili izolacija drugih tvari.
Za otkrivanje antitijela koriste se posebni testni sustavi s pragom osjetljivosti od najmanje 50 IU/ml. Ako se otkriju antitijela, propisuju se drugi testovi za razjašnjavanje. Ako je rezultat negativan, daljnje testiranje se neće raditi.
U nekim slučajevima lažno negativan rezultat može biti posljedica nesposobnog laboratorijskog osoblja ili nekvalitetnih reagensa. Za osiguranje, bolje je ponoviti analizu negdje drugdje.
Kvantitativni PCR
Metoda se koristi za izravno proučavanje broja flavivirusa u jednom reakcijskom ciklusu. Za precizno mjerenje koriste se fragmenti DNA koji se koriste za hibridizaciju ili fluorescentno obilježeni primeri. Postoji ekonomična opcija detekcije pomoću SYBL Green boje. Boja je uglavljena u mali utor u DNK i postaje plava kada se ozrači laserom.
Koncentraciju određuje aparat-pojačalo u digitalnom ekvivalentu. Vrijednosti se mogu neznatno razlikovati između laboratorija i stoga ih treba usporediti s referentnim vrijednostima.
Kvantitativni PCRhepatitis C pomaže odabrati optimalnu dozu lijekova i odrediti trajanje terapije. Učestalost istraživanja ovisi o stadiju bolesti, vrsti genotipa i propisanom tijeku liječenja.
Određivanje genotipa
Virus hepatitisa C ima promjenjiv genetski sastav. Brojne modifikacije onemogućuju stvaranje cjepiva, a također kompliciraju terapiju. Ukupno je identificirano i zabilježeno 11 genotipova i 100 podtipova. U zemljama bivšeg SSSR-a, kod osoba zaraženih hepatitisom C, PCR uglavnom otkriva genotipove 1b i 3.
U prisutnosti bilo kojeg od genotipova, ciroza ili rak jetre mogu se zabaviti. Zato je toliko važno otkriti virus na vrijeme.
Za neke pacijente, određeni lijekovi dizajnirani za borbu protiv HCV-a su toksični. Genotipizacija vam omogućuje da odredite vrstu proteina i prepišete učinkovit lijek.
U rezultatima testova tipkanja nalazi se broj s malim latiničnim slovom koji označava genotip virusa. Ako je HCV otkriven, ali nije upisan, to znači da osoba ima genotip koji nije tipičan za određeno geografsko područje.
rezultati analize
Liječnik se bavi dešifriranjem rezultata. Samo podaci iz nekoliko studija (zajedno s anamnezom i pregledom) mogu dati opću stvarnu sliku povijesti bolesti.
- Kod zdrave osobe, test za kvalitativne reakcije u biomaterijalu ne otkriva ništa. Ako je naznačena vrijednost "otkrivena", infekcija je potvrđena, a pacijentpotrebna je daljnja dijagnoza nakon čega slijedi liječenje.
- Određivanje broja infektivnih uzročnika omogućuje procjenu virusnog opterećenja na tijelu. Normalno, kvantitativni PCR hepatitisa C ne otkriva patogena. Pokazatelj do 810^5 smatra se malim opterećenjem i, uz odgovarajuću terapiju, jamči povoljan ishod. Više vrijednosti zahtijevaju dubinsko ispitivanje i određivanje dugotrajne terapije, za čiji pozitivan ishod nitko ne može jamčiti.
- Pozitivni rezultati genotipizacije pokazuju koji je genotip prepoznat. Negativan rezultat ukazuje ili na odsutnost flavivirusa ili na prisutnost genotipa koji nije tipičan za ovu regiju.
Što pokazuje pozitivan PCR test
Svaka ozbiljna bolest zahtijeva sveobuhvatnu dijagnozu. Pozitivan PCR na hepatitis C potvrđuje dijagnozu, ali predviđanja se mogu dati samo nakon dodatnih laboratorijskih i instrumentalnih studija.
Otkrivanje virusa ne daje potpunu sliku patologije. Potrebno je identificirati njegovu vrstu i prirodu, utvrditi kako utječe na jetru i druge organe. Rano otkrivanje HCV-a često ima povoljan terapijski ishod.
Negativan PCR s pozitivnom ELISA
Kada se promatraju simptomi karakteristični za oštećenje jetre, postoji velika vjerojatnost da je infekcija već ušla u tijelo. Stoga se trebate obratiti hepatologu ili specijalistu za zarazne bolesti. Tijekom razgovora specijalist će prikupiti anamnezu i propisati potrebne preglede.
Akorezultati studija o hepatitisu C PCR su negativni, a enzimski imunotest je pozitivan, što ukazuje na prisutnost antitijela na flavivirus u krvi. To se obično događa kada infekcija uđe u organizam u maloj količini, pa se imunološki sustav sam nosi s njom. Ali takvi se ljudi i dalje smatraju zaraženima i moraju se pregledavati svakih 6 mjeseci. Ako se s takvim rezultatima testa osobi uskrati besplatan liječnički pregled, bolje je uz naknadu uzeti PCR radi očuvanja zdravlja, a ako su rezultati pozitivni, obratiti se specijalistu radi dijagnoze i liječenja.
Prednosti i nedostaci metode
Prilikom postavljanja dijagnoze hepatitisa C, PCR ima nekoliko prednosti:
- Rano otkrivanje patogena.
- Točna definicija virusa.
- Učinkovitost dijagnostike.
- Minimalna stopa pogreške.
- Visoka osjetljivost.
Nedostaci metode:
- Visoka cijena analize. Test zahtijeva skupu opremu, reagense i visokokvalificirano medicinsko osoblje. Sve zajedno daje znatnu količinu.
- Strogi zahtjevi za transport biomaterijala.
Liječenje upale jetre
PCR analiza na virus hepatitisa C smatra se temeljnom za dijagnozu, ali ne i konačnom. Da bi terapija bila učinkovita, potrebno je provesti niz dodatnih laboratorijskih i instrumentalnih studija. Nakon što prođe svedijagnostičke mjere koje liječnik propisuje liječenje:
- Propisana je dijeta 5.
- Alkohol je potpuno isključen.
- Zajednički prijem interferona i ribavirina 25 dana.
- Tečajevi hepaprotektora "Essentiale", "Karsil", "Phosphogliv".
- U posebnim slučajevima koristi se diskretna plazmafereza.
Lijekovi koje je propisao hepatolog koriste se redovito, bez promjene doze. Trajanje uzimanja lijekova određuje liječnik nakon prolaska kontrolnih testova. Nakon završenog tečaja terapije, morate posjetiti liječnika svakih šest mjeseci.
PCR-dijagnostika omogućuje identifikaciju uzročnika hepatitisa C u ranoj fazi. To doprinosi učinkovitosti terapije i sprječavanju prijelaza bolesti u tako opasne oblike kao što su ciroza i hepatocelularni karcinom.
