Prema statistikama WHO-a, u posljednjih 40 godina, 25 milijuna ljudi umrlo je od AIDS-a. Šteta od ove infekcije je ogromna. Pokazalo se da je većina zaraženih u Africi, odakle je i došla ova infekcija. Kod HIV-a dijagnoza bolesti postaje posebno relevantna. Istina, još nema lijekova za HIV, ali rano liječenje može produžiti život pacijenta i poboljšati njegovu kvalitetu.
Dijagnoza HIV infekcije
HIV infekcija se utvrđuje u različitim fazama sljedećim metodama:
- ELISA - enzimski imunotest.
- Western blot.
- PCR - lančana reakcija polimerazom.
- Brzi testovi.
PCR metodu razvio je američki biokemičar Kary Mullis, koji je za nju dobio Nobelovu nagradu 1983. godine. Danas se ova metoda u medicini u dijagnostici svih infekcija smatra vodećom zbog svoje točnosti i informativnosti. HIV nije iznimka u tom pogledu.
Suština analize
Svaka živa stanica sadrži RNA i DNK. Ove nukleinske kiseline su sposobne za samokopiranje i samoreplikaciju. Za svaku infekciju, fragmenti DNK su jedinstveni. NAu biološkim tekućinama ti fragmenti nukleinskih kiselina kruže. Hvata ih i prepoznaje posebna oprema – reaktor. Ovo je osnova metode. Laboratorijski asistent broji te fragmente. Retrovirus HIV prati se na RNA. Čak i s pojedinačnim kopijama virusnih čestica, PCR ih može otkriti i izbrojati.
Venska krv se najčešće koristi kao testna tekućina. Posebne komponente metode vežu se na čestice virusa i čine ih vidljivim, jer se pronađeni fragmenti umnožavaju.
U slučaju HIV-a, rezultat prisutnosti virusa može se dobiti mnogo prije nego što se pojavi klinika. Stoga, zbog svoje visoke osjetljivosti, PCR ima tako visoku dijagnostičku vrijednost. Veliki plus PCR-a je svestranost metode. Razdoblje inkubacije infekcije za PCR nije prepreka.
Trošak istraživanja
PCR metoda je prilično skupa. To je jedan od njegovih velikih nedostataka. Zahtijeva najnoviju opremu i visokokvalificiranog laboratorijskog asistenta. S obzirom na navedeno, PCR dijagnostika se ne provodi u malim naseljima. Možete se testirati samo u specijaliziranim velikim klinikama.
Cijena testiranja HIV DNA u moskovskim klinikama kreće se od 2800 rubalja, virusno opterećenje (virusna RNA u plazmi) određuje se PCR-om - od 8800 rubalja, a otpornost HIV-a na inhibitore proteaze - od 16500 rubalja. Kao što vidite, cijene su prilično visoke. PCR se može besplatno obaviti u javnim klinikama prema politici MHI. Važno,da se postupak može obaviti anonimno. U registru pacijent dobiva broj po kojem može saznati rezultat. U modernim medicinskim centrima postoje osobni računi klijenata na koje će se unositi ti podaci.
Ciljevi istraživanja
PCR dijagnostika za HIV propisuje se u takvim slučajevima:
- Otkrivanje infekcije u djeteta koje je rodila bolesna majka ili nositeljica radi utvrđivanja intrauterine infekcije.
- Ako je ELISA dala upitne rezultate (PCR za HIV pomaže u ovom slučaju da se postavi konačna dijagnoza).
- Za otkrivanje kvantitativnog sadržaja virusa u tijelu.
- S pozitivnim imunoblotom, oni se međusobno nadopunjuju s PCR-om.
- Testiranje donatora.
- Za ranu dijagnozu HIV-a.
- Za određivanje učinkovitosti i otpornosti na ART.
Prednost ove analize je da se PCR na HIV može izvesti čak i za djecu mlađu od godinu dana.
Istraživanje se često provodi ne radi primarne dijagnoze, već je već u procesu liječenja. Primarna dijagnostika su serološke studije (oni određuju razinu antitijela na HIV). Ako se lažno pozitivan rezultat ponovi, to može biti s niskim virusnim opterećenjem.
PCR dijagnosticira HIV kada još nema antitijela na njega. ELISA metoda u ovom slučaju neće dati odgovor.
I PCR za HIV će već biti pozitivan. Ali simptomi ovog razdoblja HIV-a su nespecifični. Bolesnika prvo dugo i neuspješno liječi od ARVI liječnik opće prakse. Treba imati na umu da se dijagnoza HIV-a temelji samo naPCR se ne stavlja, potrebno je proći druge opsežne testove. PCR metoda je češće pomoćna u teškim slučajevima.
Priprema za analizu
Prije uzimanja PCR-a na HIV, 2 dana prije testa, ne smijete jesti masnu hranu, alkohol. Također je bolje ne naprezati se psihički i fizički. Ako je pacijentu propisan tečaj imunostimulacije, on se prekida 2 tjedna prije analize.
Krv je najbolje uzeti ujutro. Mogu se ispitati i druge biološke tekućine u tijelu (sperma, vaginalni sekret), ali krv je najbolji materijal. Slina, znoj, urin i suze se ne koriste, jer je sadržaj virusa u njima minimalan.
Plusi PCR-a za HIV
Prednosti metode su iznimno mala vjerojatnost lažno pozitivnog rezultata, univerzalnost reakcije za sve biološke tekućine u tijelu. Analiza ima širok raspon:
- Jedno vađenje krvi može se koristiti za otkrivanje različitih infekcija.
- Tehnika je hitna, rezultat je spreman već sljedeći dan.
- Povjerenje je između 85 i 98%.
- Prisutnost HIV-a može se utvrditi 10-14 dana nakon infekcije (trenutačno još nema antitijela).
- Bez dobnih ograničenja, može se izvesti odmah od rođenja.
Nedostaci metode
Nedostaci PCR-a su sljedeći:
- Trošak analize.
- Zahtijeva sofisticiranu medicinsku opremu.
- Zahtijeva visokokvalificiranog laboratorijskog asistenta i liječnika,analiza korisnika.
- Reakcija je vrlo osjetljiva, pa greška može biti 20%.
- Može rezultirati lažno pozitivnim rezultatom ako pacijent ima autoimune procese, onkologiju, kronične infekcije.
- Potrebna je posebna čistoća laboratorijskih prostorija, jer virus u analizu može dospjeti iz zraka. Tada će rezultat biti pogrešan.
Za laboratorije koji provode PCR, radi poboljšanja kvalitete dijagnostike, razvijene su posebne stroge mjere prema SanPiN sustavu za internu kontrolu. Osim toga, moraju se poštivati sva pravila rada s ovom tehnikom:
- Obavezno striktno slijediti podatke na epruvetama.
- Prije uzimanja uzorka krvi, pogledajte ponovo i provjerite je li analiza zakazana.
- Sestra mora ispravno označiti cijevi.
- Laboratorijski asistent mora ispravno izvesti sve manipulacije s biomaterijalom kako bi spriječio unakrsnu kontaminaciju.
- Test sustav mora biti izvrsne kvalitete.
Samo ako su ispunjeni svi ovi uvjeti, pogreška u odgovoru može biti samo oko 2% epizoda.
Trajanje analize
Mnoge zanima koliko dugo će biti spreman PCR za HIV. Dijagnoza traje ne više od 8 sati. Pacijent može dobiti odgovor već sljedeći dan. Ekspresno testiranje se izvodi u roku od 2 sata.
PCR pouzdanost
Unatoč brojnim prednostima, PCR se ne smatra idealnom dijagnostičkom metodom. Kontaktira se u slučajupotreba za probnim testovima za prisutnost HIV-a u tijelu.
Kada se uzima krv za analizu?
Koliko dugo treba uzeti PCR za HIV? Pouzdan rezultat može se dobiti već pri vađenju krvi 4-4 dana nakon navodne infekcije. Nakon 2 tjedna, pouzdanost za HIV bit će 98%, a s razdobljem od 5 dana - 80%. Prisutnost negativnog rezultata u PCR-u za HIV bit će pouzdana, ali za apsolutno točan rezultat, također se provodi ELISA.
ELISA analiza bit će učinkovita samo ako postoje antitijela na virus, ovo vrijeme može potrajati od 1-3 mjeseca do šest mjeseci. Budući da ELISA daje veću vjerojatnost (98% -99,9%), PCR se ne može nazvati 100% potvrdnim testom za prisutnost HIV infekcije. Ali s druge strane, ovo je jedina tehnika u kojoj ne morate čekati pojavu antitijela.
S HIV-om, PCR može pružiti informacije o učinkovitosti ART-a, stadiju HIV bolesti i broju VN-a (kvantitativna procjena prisutnosti HIV-a u tijelu). To će govoriti o ozbiljnosti i opsegu promjene.
PCR testiranje na HIV također je potrebno ako postoje antitijela u krvi, ali njihova prisutnost ne ukazuje na klinički pouzdanost HIV infekcije.
Testiraju se ne samo na infekciju i slučajni seks. Ostale prilike:
- Planiranje trudnoće.
- Nadolazeća operacija.
- Povremeni seks.
- Neke profesije zahtijevaju ovaj test za prijem na posao (učitelji, liječnici i drugo medicinsko osoblje).
- Zatvorenici.
- TBC pacijenata.
- Zaposlenici Ministarstva za izvanredne situacije i policije.
- Vraćeno s odmora iz egzotičnih zemalja (ako se želite uvjeriti da nema infekcije).
- Prostitutke.
- Strani studenti.
- Droge.
Također, određeni simptomi kod pacijenta mogu prisiliti na testiranje na HIV:
- Nagli gubitak težine.
- Proljev koji traje više od 3 tjedna
- Nerazumno visoka temperatura dulje vrijeme.
- Otečeni limfni čvorovi.
- Neobjašnjivi uzrok upale pluća, kandidijaze, itd.
Dešifriranje analize prerogativ je liječnika, a ne laboratorijskog asistenta.
PCR ili ELISA, što je bolje?
Kada se PCR-dijagnostika RNA virusa HIV-a otkrije i kvalitativno i kvantitativno. Ova analiza jasno identificira specifičan patogen čak i ako postoji više patogena koji reagiraju unakrsno. Biološki materijal se može koristiti čak iu osušenom obliku. Nedostatak je visoka osjetljivost PCR-a, kada se lažno pozitivan rezultat može dati prisustvom čak i male količine strane DNK na instrumentima ili epruveti.
Zadatak i mogućnost ELISA-e je utvrditi prisutnost antitijela na retrovirus. Iako je njegova točnost 99%, nije primjenjiv u ranim fazama.
Kvalitativno testiranje na HIV
Visokokvalitetni PCR za HIV utvrđuje prisutnost virusa u tijelu. Rezultati će u ovom slučaju izgledati ovako: pozitivni, lažno pozitivni, negativni. Ali ova studija neće dati informacije o količini retrovirusa. Takva kvalitativna analizaneprikladno kada je HIV infekcija već otkrivena u tijelu na druge načine.
Nemoguće je kontrolirati učinkovitost liječenja visokokvalitetnim PCR-om.
kvantifikacija HIV-a
Izvode samo osobe zaražene HIV-om kako bi se prebrojio broj kopija virusne RNA u biološkom proizvodu.
Svrha takve studije je pratiti liječenje koje je u tijeku i identificirati otpornost virusa na njega. Antivirusnu terapiju u takvim izračunima liječnik ne propisuje slijepo, pa će biti učinkovitija. Kvantitativni PCR za HIV infekciju radi se mnogo češće. Ova se analiza prikazuje kao kopija/ml krvi.
Koji se rezultati mogu dati:
- Virusna RNA je odsutna ili je vrlo mala (oko 20 kopija/ml). Nema sigurnosti u dijagnozu.
- Od 20 - do 10 do 6. stupnja kopija / ml - dijagnoza je pouzdana.
- Više od 106 kopija/ml - visoki VN.
Laboratoriji mogu provesti PCR testiranje na HIV u stvarnom vremenu. To podrazumijeva promatranje i numeričku evaluaciju nakupljanja PCR proizvoda uz automatsko bilježenje rezultata.
